背景：

        环状RNA（circular RNA，circRNA）是最近发现的一类特殊的非编码RNA，它大量存在于真核细胞胞质内，主要由pre-mRNA通过可变剪切加工产生。
       近年研究发现，circRNA具有很多重要的调控功能，例如，环状RNA分子富含miRNA结合位点，可以作为竞争性内源RNA（competing endogenous RNA，ceRNA）结合胞内miRNA，在细胞中起到miRNA海绵的作用，能阻断或降低miRNA对靶基因的抑制作用，从而促进靶基因的表达；这一作用机制被称为竞争性内源RNA机制。2013年在同一期《自然》杂志上，科学家证明了环状RNA分子具有的miRNA海绵效应。除此以外，circRNA也具有调控其他类型RNA、调节蛋白质活性等功能。circRNA在不同物种中具有保守性，而且存在组织表达差异，且circRNA的环状结构对RNase不敏感，导致它比线性RNA更为稳定，这些特性使得circRNA具有开发疾病新型诊断与治疗方法的巨大潜力，研究意义重大。

服务概述：

         环状RNA（circRNA）是目前生命科学领域新兴的研究热点分子之一。与传统的线型RNA不同，环状RNA分子呈封闭环状结构，不受RNA外切酶影响，表达更稳定，不易降解。环状RNA由特殊的选择性剪切产生，大量存在于真核细胞的细胞质中，具有一定的组织、时序和疾病特异性。环状RNA的这些特征都表明，这种分子有巨大潜力成为新的疾病诊断标志物。这使得环状RNA在作为新型临床诊断标记物的开发应用上具有明显优势。

        ag8亚游集团生物使用Eppendorf Mastercycler^® eprealplex实时荧光定量PCR仪，用染料法或Taqman探针法对circRNA 进行Real Time PCR定量测定 ，技术灵敏度高、线性范围宽、特异性好、重复性佳。同时，可根据客户需求及实验需要为您提供一体化circRNA荧光定量技术服务，您只需要提供保存完好的组织或细胞样本，本公司专业技术人员将为您量身制定实验方案，完成circRNA荧光定量PCR实验操作和数据分析，提供完整的实验报告，为您节省大量的时间和精力。

服务内容：

           1、 制定个性化实验方案

                   根据不同的实验目的确定适合实验方法、选定合适的内参；

2、 引物设计、合成及优化

       a.   根据客户提供的基因信息设计引物，在引物设计的时候，选择在环化位点附近，设计一对外扩的引物，避免线性扩增，增加特异性。

      b.  引物溶解后进行含SG（SYBR^®Green）的PCR反应的优化。

3、RNA抽提

      a.   组织样本：取适量新鲜组织或是保存得当的组织样本，匀浆后加入Trizol试剂进行RNA抽提。

      b.   细胞样本：取适量细胞，用PBS清洗三次后加入Trizol试剂进行RNA抽提。

4、RNA质量检测

    a.   紫外分光光度法检测RNA在波长260nm和280nm的吸收值，观察A₂₆₀/A₂₈₀ 、A₂₆₀/A₂₃₀比值及连续波长吸收峰，计算RNA溶液浓度并评估RNA纯度。

    b.  使用甲醛电泳试剂进行变性琼脂糖凝胶电泳，检测RNA纯度及完整性。

5、逆转录合成cDNA

     按照逆转录酶使用说明将样品RNA逆转录为cDNA。

6、 荧光定量PCR预实验

     根据样本反转录的cDNA、配置PCR反应体系及进行Real-Time PCR反应；

7、正式荧光定量PCR实验

                   根据预实验结果进行正式实验，以合成的cDNA为模板，进行定量PCR扩增，同时检测每个样品内参基因 的表达量，用以校正上样误 差。

8、结果分析，提供详尽的实验报告

服务特色:

 ·  最先进的设计软件，确保探针及引物设计的特异性

 ·  探针法或染料法定量分析，一切以客户需求为导向

 ·  探针合成委托国内最好的合成公司，确保探针质量

 ·  染料法采用2 ^-ΔΔCt 法，操作简便，节约时间

 ·  正式实验前先进行预实验，慎重对待客户的委托

 ·  普通PCR无扩增条带的基因，保证再做一次重复验证

 ·  报告详尽，数据可靠，结果真实，实验科学

服务流程：

1、    客户提供需要检测的环状RNA基因名称、登录号或序列；

2、    确认样本数量、种属、样本类型；

3、    我司技术部根据客户提供的信息设计好实验方案，销售做出报价合同；

4、    客户确定无误后签订《ag8亚游集团生物-cicRNA qPCR检测服务合同》，并签字（或盖章）；

5、    支付预付款，服务正式启动；

6、    提供实验样品（细胞、组织、血液）；

7、    技术员根据合同实验方案开展实验；

8、    实验结束后，发送初步实验报告；

9、    支付实验尾款；

10、 发送详细实验报告，完成实验项目。

我们提供：

1、    实验所需的试剂；

2、    RNA提取质量检测电泳图；

3、    环状和线性RNA同时检测；

4、    定量检测原始数据、扩增曲线、溶解曲线；

5、  详细的实验报告、结果分析。
   
 

杭州ag8亚游集团生物技术有限公司

地址：浙江省杭州市西湖区西湖科技园数字信息产业园D座3层

电话： 13732202380       邮箱： service@sinoprotein.com

网址：/