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    circRNA定量PCR

    背景:

            环状RNA(circular RNA,circRNA)是最近发现的一类特殊的非编码RNA,它大量存在于真核细胞胞质内,主要由pre-mRNA通过可变剪切加工产生。
           近年研究发现,circRNA具有很多重要的调控功能,例如,环状RNA分子富含miRNA结合位点,可以作为竞争性内源RNA(competing endogenous RNA,ceRNA)结合胞内miRNA,在细胞中起到miRNA海绵的作用,能阻断或降低miRNA对靶基因的抑制作用,从而促进靶基因的表达;这一作用机制被称为竞争性内源RNA机制。2013年在同一期《自然》杂志上,科学家证明了环状RNA分子具有的miRNA海绵效应。除此以外,circRNA也具有调控其他类型RNA、调节蛋白质活性等功能。circRNA在不同物种中具有保守性,而且存在组织表达差异,且circRNA的环状结构对RNase不敏感,导致它比线性RNA更为稳定,这些特性使得circRNA具有开发疾病新型诊断与治疗方法的巨大潜力,研究意义重大。

     

     

     

    服务概述:

             环状RNA(circRNA)是目前生命科学领域新兴的研究热点分子之一。与传统的线型RNA不同,环状RNA分子呈封闭环状结构,不受RNA外切酶影响,表达更稳定,不易降解。环状RNA由特殊的选择性剪切产生,大量存在于真核细胞的细胞质中,具有一定的组织、时序和疾病特异性。环状RNA的这些特征都表明,这种分子有巨大潜力成为新的疾病诊断标志物。这使得环状RNA在作为新型临床诊断标记物的开发应用上具有明显优势。

            ag8亚游集团生物使用Eppendorf Mastercycler® eprealplex实时荧光定量PCR仪,用染料法或Taqman探针法对circRNA 进行Real Time PCR定量测定 ,技术灵敏度高、线性范围宽、特异性好、重复性佳。同时,可根据客户需求及实验需要为您提供一体化circRNA荧光定量技术服务,您只需要提供保存完好的组织或细胞样本,本公司专业技术人员将为您量身制定实验方案,完成circRNA荧光定量PCR实验操作和数据分析,提供完整的实验报告,为您节省大量的时间和精力。

     

    服务内容:

               1、 制定个性化实验方案

                       根据不同的实验目的确定适合实验方法、选定合适的内参;

    2、 引物设计、合成及优化

           a.   根据客户提供的基因信息设计引物,在引物设计的时候,选择在环化位点附近,设计一对外扩的引物,避免线性扩增,增加特异性。

          b.  引物溶解后进行含SG(SYBR®Green)的PCR反应的优化。

    3、RNA抽提

          a.   组织样本:取适量新鲜组织或是保存得当的组织样本,匀浆后加入Trizol试剂进行RNA抽提。

          b.   细胞样本:取适量细胞,用PBS清洗三次后加入Trizol试剂进行RNA抽提。

    4、RNA质量检测

        a.   紫外分光光度法检测RNA在波长260nm和280nm的吸收值,观察A260/A280 、A260/A230比值及连续波长吸收峰,计算RNA溶液浓度并评估RNA纯度。

        b.  使用甲醛电泳试剂进行变性琼脂糖凝胶电泳,检测RNA纯度及完整性。

    5、逆转录合成cDNA

         按照逆转录酶使用说明将样品RNA逆转录为cDNA。

    6、 荧光定量PCR预实验

         根据样本反转录的cDNA、配置PCR反应体系及进行Real-Time PCR反应;

    7、正式荧光定量PCR实验

                       根据预实验结果进行正式实验,以合成的cDNA为模板,进行定量PCR扩增,同时检测每个样品内参基因 的表达量,用以校正上样误 差。

    8、结果分析,提供详尽的实验报告

     

    服务特色:

     ·  最先进的设计软件,确保探针及引物设计的特异性

     ·  探针法或染料法定量分析,一切以客户需求为导向

     ·  探针合成委托国内最好的合成公司,确保探针质量

     ·  染料法采用2 -ΔΔCt 法,操作简便,节约时间

     ·  正式实验前先进行预实验,慎重对待客户的委托

     ·  普通PCR无扩增条带的基因,保证再做一次重复验证

     ·  报告详尽,数据可靠,结果真实,实验科学

     

    服务流程:

    1、    客户提供需要检测的环状RNA基因名称、登录号或序列;

    2、    确认样本数量、种属、样本类型;

    3、    我司技术部根据客户提供的信息设计好实验方案,销售做出报价合同;

    4、    客户确定无误后签订《ag8亚游集团生物-cicRNA qPCR检测服务合同》,并签字(或盖章);

    5、    支付预付款,服务正式启动;

    6、    提供实验样品(细胞、组织、血液);

    7、    技术员根据合同实验方案开展实验;

    8、    实验结束后,发送初步实验报告;

    9、    支付实验尾款;

    10、 发送详细实验报告,完成实验项目。

     

    我们提供:

    1、    实验所需的试剂;

    2、    RNA提取质量检测电泳图;

    3、    环状和线性RNA同时检测;

    4、    定量检测原始数据、扩增曲线、溶解曲线;

    5、  详细的实验报告、结果分析。
       
     

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